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反相色譜是迄今在高效液相色譜中應(yīng)用*泛的技術(shù)，主要是因為它適用于分析絕大多數(shù)的非極性物質(zhì)和很多的可離子化的及離子化合物。如果污染是因為重復(fù)進(jìn)樣時強(qiáng)保留物質(zhì)的累積引起的，利用簡單的清洗步驟來除去這些污染物往往就能恢復(fù)其色譜性能。經(jīng)過等度運(yùn)行后的高效液相色譜柱，有時用90～100%含量的溶劑B(雙溶劑反相系統(tǒng)中洗脫能力較強(qiáng)的溶劑，如甲醇、乙晴、四氫呋喃等)沖洗20個柱體積可以清除污染物(色譜柱的柱體積和空柱管體積概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱體積只有2.5ml，2.1x...

液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分，其化學(xué)性質(zhì)參數(shù)包括以下幾個方面：1、硅膠基質(zhì)硅膠基質(zhì)是通用的基質(zhì)，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達(dá)到1—12)。2、聚合物基質(zhì)聚合物基質(zhì)多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學(xué)穩(wěn)定，應(yīng)用pH范圍寬，具有更強(qiáng)的疏水性，對蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強(qiáng)度較小，有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損，批次重復(fù)性較差，商品化色譜柱不多，一般價格較貴。3、載碳量載碳量是基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高，則...

離子色譜柱是一種用來改善在反相色譜中保留較差的強(qiáng)極性物質(zhì)保留行為的色譜技術(shù)。它通過采用強(qiáng)極性固定性，并且結(jié)合高比例有機(jī)相/低比例水相組成的流動相來實(shí)現(xiàn)這一目的。而這樣的流動相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質(zhì)譜的靈敏度。離子色譜柱的分離機(jī)制：分離機(jī)理在目前還存在著爭議，主要包括以下三個方面：(1)分配機(jī)理(2)離子交換(3)偶極-偶極相互作用。更多的試驗現(xiàn)象則表明HILIC色譜柱的保留機(jī)理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級效應(yīng)，很難將其區(qū)分開來。影響離子色譜柱保留的主要...

色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。樣品的前處理過程：(1)最好使用流動相溶解樣品。(2)使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。(3)使用0.45μm或0.22μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。實(shí)際使用中，液相色譜柱有可能會失效，常見的原因有：1、色譜柱...

使用高效液相色譜柱做HPLC分析時，通常會遇到色譜柱柱壓過高等情況，色譜柱柱壓過高原因何在?怎么解決呢?高效液相色譜柱柱壓高原因與解決方法：色譜柱柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因：1、拆去保護(hù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查3、將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱...

液相色譜柱流動相的配制和流速的選擇1、流動相的配制液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：(1)流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。(2)流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(3)流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。(4)流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制...

氣相色譜柱在石油、化工、生物化學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品工業(yè)、環(huán)保等方面應(yīng)用很廣。它除用于定量和定性分析外，還能測定樣品在固定相上的分配系數(shù)、活度系數(shù)、分子量和比表面積等物理化學(xué)常數(shù)。氣相色譜柱柱溫的選擇：柱溫是影響分析時間和分離度的重要因素。選擇柱溫的依據(jù)是樣品的沸點(diǎn)范圍，固定液的配比，允許使用溫度，以及檢測器的靈敏度。柱溫主要影響分配系數(shù)、容量因子以及組分在流動相和固定相中的擴(kuò)散系數(shù)，從而影響分離度和分析時間。選擇溫柱的原則，一般是在使難分離物質(zhì)對達(dá)到要求的分離度條件下，盡可能采...